Biologischer Puffer Trometamol Tris-Basis-77-86-1

Tris Base 77-86-1 Biologischer Puffer Trometamol

Verwendungen von Tris-Puffer in der Proteinelektrophorese und Western Blotting

Die meisten SDS-PAGE-Gele, laufende Puffer und Puffer werden mit Tris puffert.Alle gängigen Puffer sind vorgemischt, oder, wenn Sie lieber Ihren eigenen Tris-Puffer herstellen, können Sie mit gereinigtem Tris-Pulver, Glycin und anderen Pufferreagenzien der Molekularbiologie beginnen.

Die meisten SDS-Gele verwenden ein diskontinuierliches Tris-Puffersystem.8Bei diesem pH-Wert wandern ionisierte Chlorid-Ionen rasch ab, erhöhen den pH-Wert hinter sich und erzeugen einen Spannungsgradienten mit einer Zone niedriger Leitfähigkeit.die Glycin (aus dem laufenden Puffer) veranlasst, sich zu ionisieren und hinter die Chloridfront zu wandernDie meisten Peptide in der Probe, die aufgrund der gebundenen SDS eine negative Ladung aufweisen, wandern zwischen dem Chlorid und Glycin und bilden ein schmales Band und werden so "stapelt".

Sobald der Stapel das auflösende Gel erreicht hat, das sich bei einem höheren pH-Wert befindet (typischerweise pH 8,7 – 8,8), führt die erhöhte Ionisierung des Glycins dazu, dass es beschleunigt und die Peptide überholt.die kleinere Porengröße des auflösenden Gels beginnt eine Siebewirkung zu haben, wodurch die Peptide nach Größe getrennt werden.

Die meisten westlichen Blotting-Protokolle verwenden einen Tris-Puffer mit geringer Ionenstärke für die Proteindurchführung.

Verwendung von Tris-Puffer in der Nucleinsäure-Agarose-Elektrophorese

Tris-Puffer werden häufig für die DNA-Agarose-Elektrophorese eingesetzt.Obwohl es einige Unterschiede in der Auflösung verschiedener DNA-Formen und ihrer Mobilität während der Elektrophorese gibtDie Borat-Ionen in TBE hemmen viele Enzyme, also ohne eine Art DNA-Reinigung nach der Elektrophorese,Einige enzymmedierte nachgelagerte Manipulationen funktionieren möglicherweise nichtDaher ist der TAE-Puffer für den täglichen Einsatz in den meisten DNA-Laboren bevorzugt.

Wie man einen Tris-Puffer macht

Der Tris-Puffer ist eine gute Wahl für die meisten biologischen Systeme, da er bei 25°C einen pKa von etwa 8,1 aufweist, was ihn zu einem effektiven Puffer im pH-Bereich von 7-9 macht.Dieser pH-Bereich eignet sich für die meisten biologischen ProzesseTrispulver ist auch kostengünstiger und robuster als spezialisierte Puffer wie HEPES.

Es gibt zwei Möglichkeiten, eine Tris-Pufferlösung herzustellen. Eine ist, Lösungen von Tris-Basis und Tris-HCl herzustellen, beide in der gewünschten Konzentration,und dann Aliquoten einer Lösung (in der Regel Tris HCl) in die andere Lösung (in der Regel Tris-Basis) hinzufügen, während der pH-Wert beobachtet wird, bis der richtige pH-Wert erreicht istIn der Praxis geschieht dies nur sehr selten.

Die übliche Methode zur Herstellung der meisten häufig verwendeten Tris-Puffer besteht darin, mit nur Tris-Basis zu beginnen.und dann wird der Puffer bis zum gewünschten Volumen aufgebautUnter der Annahme, daß beim Anpassen des pH-Wertes keine Überschreitung stattfindet, ändert diese Methode die Ionenstärke nicht.oder mit Tris HCl und Anpassung des pH-Wertes mit NaOHJe nach Verwendungszweck des Tris-Puffers kann eine solche Änderung wichtig sein oder nicht.

Bei der Herstellung eines Tris-Puffers ist es wichtig, bei der pH-Anpassung eine Tris-kompatible Elektrode zu verwenden.Einfachverbundene Ag/AgCl-Elektroden können bei Verwendung mit Tris-Puffern Instabilität aufweisen, da das Silber die Elektrode allmählich precipitiert und verstopftDie Verwendung von Doppelverbindungs- oder Calomel-Referenzelektroden sorgt für genaue pH-Messungen im Tris-Puffer.